一、产品简介

产品名称：耐碱Protein A亲和介质

产品介绍：羧基活化偶联介质可用于各种含有氨基的亲和配基（蛋白质、多肽、糖等）的偶联，广泛十分广泛。ECH-activated QZT 4FF活化偶联介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，经过一系列的活化步骤，最终形成活化羧基，在温和的条件下就可以偶联各种带氨基的配基。EAH-activated QZT 4FF活化偶联介质具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广的特点。

二、产品特性

羧基活化偶联介质的理化性质和产品特性如表1所示。

表1 羧基活化偶联介质的理化性质和产品特性

参数	指标
基质	4%交联琼脂糖凝胶
活化基团	羧基
形状	球形
介质平均粒径	90 μm (45-165)
活化基团密度	12-18 μmol /ml wet gel
偶联条件	pH 4.5, 4 oC–室温, 2-24h
最高流速（25℃）	450 cm/h
推荐流速	150 cm/h
最高耐压	0.3 MPa (3 bar)
保存	-20 oC（100%异丙醇）

 

三、产品应用

ECH-activated QZT 4FF活化偶联介质广泛用于各种含有氨基的亲和配基（蛋白质、多肽、糖等）的偶联。具体的操作步骤如下（以4ml活化胶偶联BSA为例）：

（1）将约4 ml ECH活化胶水洗3-5次后抽干，再用稀HCl，pH 4.5溶液清洗2次，抽干后将4 ml ECH活化胶（约3.0 g）加入到10 ml的反应器（磨口三角瓶或离心管）中，备用。

（2）准确称取40 mg BSA溶于4.0 ml稀HCl, pH 4.5溶液，溶解完全后加入84 mg EDC.HCl，溶解完全后测量其pH是否为4.5，否则需调到4.5，备用。

（3）将BSA溶液加入到活化胶中，反应温度恒定在4℃或25℃，摇床中振荡混合（离心管水平放置），转速120 rpm，反应时间24 h（反应前1小时pH有明显的下降，可在15、30、45、60 min时测量pH并加入适量稀NaOH 调pH至4.5）。

（4）反应停止后，静置，取上清离心（3000 g，5 min，室温），收集上清液用于未偶联BSA的浓度分析，计算偶联的BSA的配基密度；将其余料液转移到砂芯漏斗中用去离子水清洗、抽干。

（5）封闭未反应的ECH：一般不需要封闭，如需封闭未反应的羧基，可在偶联反应后（注意是在清洗前）直接往反应物中加入4.2 ml 1 M 氨基葡萄糖或乙醇胺，继续反应4h。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干，用去离子水清洗。

（6）清洗 将制得的BSA琼脂糖凝胶依次用5倍的去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液（pH 4.0）、去离子水、0.1M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液（pH 8.0）和去离子水充分洗涤（重复清洗3次），抽干，去除未反应的配基。

（7）保存 制得的BSA亲和介质保存于4℃、20%乙醇溶液中。

备注：其他配基的偶联方法与BSA类似，但反应条件（温度（4 oC至室温）、时间（4-24 h）、配基加入量）需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。

 

注意事项：通常用稀盐酸作为偶联溶液，如果选用缓冲液要避免使用含有氨基、羧基、磷酸基的缓冲液。