常用于毛细管电泳的缓冲溶液有: 硼砂、磷酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐和醋酸 缓冲体系的pH值要求与样品的性质有关 通常酸性组分的分离选择在碱性条件下进行,碱性组分则选择酸性介质分离 蛋白质、多肽、氨基酸等两性物质,可选酸性(pH2)也可选碱性(H>9)分离介质。 在毛细管电泳分离中 缓冲液是背景电解质 分离是基于样品中各个组分间质荷比的差异。 有时需在缓冲液中加入定的添加剂,用以提高分离选择性,改变电渗流的大小、方向或抑制毛细管壁的吸附等。 影响分离的操作条件为 ◆分离电压 ◆背景电解质种类、浓度和pH ◆添加剂种类和浓度 1.分离电压 分离效率与电压间存在极大值。极大电压通常也是最佳工作电压。 在实际分离中,如果所用的毛细管很细或缓冲液的电导很低,极大电压可能会超出仪器范围,此时没有最佳电压,可选择仪器允许的最大输出电压。 ・当毛细管较粗或缓冲液电导较高时,极大电压可能很小,若此时分离度很高,也可选择大于极大值的电压进行分离 2.分离温度 毛细管的温度不仅影响分离的重视性,而且影响分离效率。 温度选择应考虑热效应、分析重现性、分离效率和分离介质对温度的限制等因素。 ・温度的确定也应通过实验,多数情况下,在20~30℃之间进行电泳,能获得良好的分离效果。可根据初步分离结果调整温度 ・蛋白质分离需要低于室温的分离条件。演 3.背景电解质 对背景电解质的要求: ①在所选择的pH范围内有足够大的缓冲容量。 ②在检测波长处的吸收低。 ③自身的淌度低,即分子大而荷电小,以减少电流的产生 ④应使被测组分带合适的电荷量,以实现有效进样和有合适的电泳淌度 ⑤尽可能采用酸性缓冲溶液,在低pH下,吸附和电渗流值都很小。 ⑥与毛细管种类匹配,涂层毛细管只能在一定pH范围内使用 |
常用于毛细管电泳的缓冲溶液有: 硼砂、磷酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐和醋酸 缓冲体系的pH值要求与样品的性质有关 通常酸性组分的分离选择在碱性条件下进行,碱性组分则选择酸性介质分离 蛋白质、多肽、氨基酸等两性物质,可选酸性(pH2)也可选碱性(H>9)分离介质。 在毛细管电泳分离中 缓冲液是背景电解质 分离是基于样品中各个组分间质荷比的差异。 有时需在缓冲液中加入定的添加剂,用以提高分离选择性,改变电渗流的大小、方向或抑制毛细管壁的吸附等。 影响分离的操作条件为 ◆分离电压 ◆背景电解质种类、浓度和pH ◆添加剂种类和浓度 1.分离电压 分离效率与电压间存在极大值。极大电压通常也是最佳工作电压。 在实际分离中,如果所用的毛细管很细或缓冲液的电导很低,极大电压可能会超出仪器范围,此时没有最佳电压,可选择仪器允许的最大输出电压。 ・当毛细管较粗或缓冲液电导较高时,极大电压可能很小,若此时分离度很高,也可选择大于极大值的电压进行分离 2.分离温度 毛细管的温度不仅影响分离的重视性,而且影响分离效率。 温度选择应考虑热效应、分析重现性、分离效率和分离介质对温度的限制等因素。 ・温度的确定也应通过实验,多数情况下,在20~30℃之间进行电泳,能获得良好的分离效果。可根据初步分离结果调整温度 ・蛋白质分离需要低于室温的分离条件。演 3.背景电解质 对背景电解质的要求: ①在所选择的pH范围内有足够大的缓冲容量。 ②在检测波长处的吸收低。 ③自身的淌度低,即分子大而荷电小,以减少电流的产生 ④应使被测组分带合适的电荷量,以实现有效进样和有合适的电泳淌度 ⑤尽可能采用酸性缓冲溶液,在低pH下,吸附和电渗流值都很小。 ⑥与毛细管种类匹配,涂层毛细管只能在一定pH范围内使用 |